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Fab片段是什么意思?義翹神州Fab片段制備服務詳解

單價: 面議
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所在地: 直轄市 北京
有效期至: 長期有效
發布時間: 2024-03-06 07:07
最后更新: 2024-03-06 07:07
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發布企業資料
詳細說明

Fab段:抗原結合片段(fragment of antigen binding,Fab),相當于抗體分子的兩個臂,由一個完整的輕鏈和重鏈的VH和CH1結構域組成。

 

Fab段包含完整的可變區,以及恒定區的CH1區域。

IgG經蛋白酶水解所形成的片段。木瓜蛋白酶水解IgG形成2個相同的Fab段和1個Fc段;胃蛋白酶水解IgG形成1個F(ab′)2段和若干多肽碎片(pFc′)。若F(ab′)2重鏈間二硫鍵斷裂,可形成2個Fab′片段,后者可進一步被酶解成Fv片段。

Fab抗原結合片段(Antigen-binding fragment),由完整的輕鏈(可變區和恒定區)和部分重鏈結構(可變區和一個恒定區片段)組成,輕鏈與重鏈通過一個二硫鍵連接。每一個Fab相當于“Y”字形抗體的左臂或右臂,體積較?。ǚ肿恿?7-48 kDa)。

由于Fab同時具備了抗原結合區和部分恒定區,使其不僅具備了單鏈抗體(scFv)一樣的抗體-抗原親和力、組織穿透力等,并擁有更穩定的結構,從而在臨床診斷和治療上發揮巨大的作用。

Fab的結構

結構上,Fab的構成包括輕鏈可變區(light chain variable domain,VL)、輕鏈恒定區(light chain constant region,CL)、重鏈可變區(heavy chain variable domain,VH)和一個重鏈恒定區(heavy chain constant region 1,CH1)。兩個Fab的CH1與抗體結晶區(crystalline fragment,Fc)的CH2通過鉸鏈部分(hinge region)連接,構成一個全長IgG抗體?;谶@種結構,通過對全長抗體進行蛋白酶酶切,也可以得到Fab片段。

例如,通過木瓜蛋白酶直接將IgG降解成兩個Fab片段和一個Fc片段,而選擇使用胃蛋白酶或無花果蛋白酶的情況下,IgG會被分解成兩個通過鉸鏈連在一起的Fab和一個沒有鉸鏈區的Fc,這兩個特殊結構分別稱為F(ab’)2片段和pFc’片段。F(ab’)2 片段可以還原成攜帶部分鉸鏈區(二硫鍵橋硫醇)的Fab片段,即Fab’。無論是Fab、Fab’或者F(ab’)2 都不含Fc區域,不會干擾抗Fc介導的抗體檢測。

Fab 抗體片段

Fab的表達

如上述中提到的,Fab可以通過在單抗的基礎上直接通過酶切獲得,這種方式優點是快速簡單,但劣勢也很明顯,首先是需要單抗原料,一般數量有限且價格昂貴,另一方面,即使優化了全抗體的酶促切割后,得到的Fab往往會損失一定的免疫反應性。 重組Fab的優勢比較明顯,由于不具備Fc區,從而不需要翻譯后修飾和糖基化,可以同時在原核和哺乳動物系統中表達。

雖然Fab可以在大腸桿菌中表達,但表達量較低,這源于其在周質空間的組裝效率較差。Fab的輕、重鏈依靠二硫鍵連接,而二硫鍵的形成離不開周質空間的氧化環境,這就需要信號肽將輕、重鏈分別引導至周質空間完成折疊,與scFv相比效率大大降低。有些研究也表明,硫氧還原蛋白酶缺失的大腸桿菌更易使Fab折疊正確,這就涉及到宿主菌株的選擇及改造,比較耗時耗力。

Fab在哺乳動物細胞中表達更加合理,正確的折疊的同時,表達量也能滿足需求。銘研生物重組抗體表達服務采用自研的哺乳動物表達系統,具備更高效、更合理的方案,詳情請咨詢。

Fab抗體文庫

理論上,小鼠B細胞抗體庫小于108,人的B細胞抗體庫小于1012。通過scFv的常規構建流程,其抗體庫容量一般在107數量級,甚至更少。而Fab組合抗體庫可以達到1010-1013的級別,這大大增加了篩選到理想抗體的可能性。

庫容量的差別源于構建方式的差別,一般的scFv展示庫的構建是通過提取RNA反轉錄得到cDNA,然后從cDNA文庫中直接通過重疊延伸拼接法,即直接在基因層次操作,在PCR中完成VH與VL基因的隨機組合,從而獲得scFv抗體的基因文庫。這種操作使建庫更加快速、方便,卻也使scFv文庫容量有限。

Fab文庫則不然,通過對完全不同的VH與VL的基因分別構建載體(也有研究證明構建在一個載體上亦可),實現VH與VL在大腸桿菌表達后實現完全地隨機在菌體內組合,從而得到容量巨大的抗體庫(理論容量可達1014)。這類建庫手段有組合感染法、Cre-LoxP體內重組等技術。受制于轉染效率的限制,雖然得到的庫容量小于理論值,依舊能提供非常大的容量,經過幾輪篩選就可以得到比較理想的抗體。

Fab的應用

Fab片段是zui早被研究的抗體片段之一,克服了多種抗體類型(傳統單抗,scFv等)很多缺點,例如Fc介導的免疫系統旁路激活、血液清除率過快、熱力學穩定性差及降低的親和力等。

如今,Fab顯著的應用是在自身免疫病、腫瘤和部分眼科等疾病的治療領域,如:已經上市的賽妥珠單抗酯(一種Fab片段),可以有效地針對類風濕性關節炎;作為Fab片段的美妥昔單抗I也已經用于治療肺癌;此外,還有雷尼珠單抗,用于眼科的黃斑病變等。

不僅在治療方面,Fab在生物傳感器方面也在發揮日益重要的作用。通過不同的固化技術,Fab已經成功固定在金、無機和塑料顆粒上,也可以固化在多糖、硅和磁性載體等的表面。這些生物傳感器可以廣泛應用于各類疾病的檢測,包括癌癥、糖尿病、自身免疫病等,再配合重組抗體生產上的優勢,Fab可以帶來巨大的社會效益。

義翹神州抗體制備服務介紹:

義翹神州在重組抗體表達方面具有豐富的經驗,除了表達全長抗體外,還可以表達各種形式的抗體片段,如單鏈抗體 (scFv)、抗原結合片段(Fab)、納米抗體 (VHH) 和抗體融合蛋白 (antibody-fusion proteins)等?;趦灮牟溉閯游锏鞍灼脚_,義翹神州可在HEK293或CHO細胞中的表達和生產Fab抗體片段。 利用此技術生產的Fab片段較酶切全長抗體獲得的Fab片段具有更好的質量。

scFv可以在微生物系統如E. coli中表達, 也可以通過瞬轉技術在哺乳動物細胞中表達。義翹神州具備在不同系統中表達不同抗體片段的能力,您可以根據實際需求進行選擇。您只需將抗體片段的基因序列發送給我們,義翹神州負責完成從基因合成到zui終純化抗體片段的整個過程。

抗體片段生產服務內容:

①基因合成及密碼子優化

②載體構建

③表達及純化

④QC分析

⑤交付內容


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更多詳情盡在義翹神州網站:https://cn.sinobiological.com/services/fab-scfv-antibody-production-service


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